中国临床药理学杂志
第34卷第3期2018年2月(总第257期)
注射用重组人肿瘤坏死因子受体突变体一Fc
融合蛋白对中国健康志愿者血浆中肿瘤坏死因子一仪浓度水平
的影响
Effects of recombinant fusion protein of human tumor necrosis factor receptor
mutant and Fc fragment for injection on the plasma concentration of tumor
necrosis factor——Ot in Chinese healthy volunteers
王艺瞳h’。，李艳h…，刘 畅h，
王炜4，王茜h，董立厚5，
陈适岫，臧彦楠6，谢振伟k，
栗占国岫，宋海峰5，方翼h
(1．北京大学人民医院，a药剂科；b．风湿免
疫科；B科研处，北京100044；2．北京大学医
学部药学院，北京100191；3．山西医科大学药
学院，太原030001；4．上海复旦张江生物医药
股份有限公司医学部，上海201210；5．军事医
学科学院放射与辐射医学研究所，北京100850；
6．首都医科大学附属北京安定医院药剂科，
北京100088)
WANG Yi—tong“”．LI Yan“”．
UU Chang“，WANG Wei4，
WANG Qian“，DONG Li—hou’，
CHEN Shi”．ZANG Yan—nano，
XIE Zhen—wei”。LI Zhan—guo”，
SONG Hai—fen93．FANG Yi“
(上伍Department 0厂P^册m何；h Department
of Rheumatology and Immunology；c Department of Scientific Research，Peking University
People’5 Hospital，8eiji,皤100044，China；2
Delxw打nent of隔ar7加cy，School of Phannaceu痞 矗，Peking砧妇巧毋，蛾100191，踟硷；三
&hod of Phom蝌。Smaxi Medical University。
Taiyuan仍∞啦。China：4 Department of Medical，Sh∞gh,a Fudan一—hw￥舰Bio—Pharmaceutical Ca Ltd。Shanghai 201210．China；
互Radial如rt and Radiation Medicine．Military
Academy of Medical Sciences Institute，Being
100850，China；6 Department of Pharmacy，
＆她Anding Hospital，capi碰Medical
University，＆咖w 100088，∞打弛)
收稿日期：2017一11一lO
修回日期：2017—12—21
作者简介：王艺瞳(1991一)，女，硕士研究生，主
要从事临床药学的相关工作
通信作者：方翼，主任药师，硕士生导师
Tel：(010)66583834
E—mail：phaseistudy@163．corn
摘要：目的研究不同剂量重组人肿瘤坏死因子受体突变体一Fc融合蛋白
[rhTNFR(m)：Fc]单次皮下给药对中国健康志愿者血浆中肿瘤坏死因子一Ot
(TNF—a)表达水平的影响。方法研究纳入56例健康成年志愿者，分为6个
剂量组，分别腹部皮下注射rhTNFR(m)：Fc 10，20，35，50，65，75 mg，测定给药前
(0 h)，给药后4，48，96，168，216，264，312，384，480 h的血浆中游离耵咂一q和
总TNF—Of的浓度。结果单次给药0—264 h后，各个剂量组志愿者体内游离
TNF—ft．和总TNF一俚浓度均出现了显著升高；在给药264～480 h后，血浆中游
离TNF—a和总TNF—Of．浓度逐渐下降；给药后480 h，游离TNF一仪浓度几乎降
至正常。在10-75 mg剂量内，血浆中游离rINF—d和总TNF—Ot在体内的暴露
量(c一)与rhTNFR(m)：Fc的剂量之间无明显的线性相关性。结论中国健康
志愿者单次给予rhTNFR(m)：Fc后，可引起血浆中游离TNF一仪和总rINF一仪水
平的升高，因此，血浆中游离TNF—a和总TNF—a水平可能并不适合作为该类
药物的药效学评价指标。
关键词：重组人肿瘤坏死因子受体突变体一Fc融合蛋白；肿瘤坏死因子一a；
依那西普
DOI：10．13699／j．cnki．1001—6821．2018．03．037
中图分类号：R971．1 文献标志码：A
文章编号：1001—6821(2018)04—0312—04
Abstract：Objective To access the effects of different doses of lfecom—
binant fusion protein of human tumor necrosis factor receptor mutant and
Fc fragment[rhTNFR(m)：Fc]after a
single subcutaneous injection on
the plasma concentration of tumor necrosis factor一0【(TNF—Ot)in
Chinese healthy volunteers．Methods A total of 56 healthy Chinese
volunteers were randomly divided into 6 groups to receive a
single injec—
tion of 10，20，35，65，75 mg of rhTNFR(m)：Fc．，11le plasma concen—
trations of TNF一仅and total TNF—d were determined at 1 h pre—dose
and at 4，48，96，168，216，264，312，384，480 h
post—dose．
Results After administration of rhTNFR(m)：Fc at 0—2“h，the plas—
ma concentrations of free TNF一仅and total TNF一0【increased signifi—
eanfly in the each group．At 264—480 h post—dose，the concentration
of them began to decrease，and at 480 h the concentration of free
TNF—a almosfly decreased to normal levels．In the dose range of
万方数据
Chin J C：lin PharmacoI 313
V01．34 No．3 February 2018(Serial No．257)
10—75 mg，the exposure of free TNF一仅and total TNF—Ot(C。，)had no significant correlation with the dose of
rhTNFR(m)：Fc．Conclusion After giving the single dose of rhrINFR(m)：Fc，there was an increase of free and total
TNF一仅plasma concentration in Chinese healthy volunteers．As a result．the plasma concentration of free and total
TNF—d may not be a suitable pharmacodynamic evaluation index．
Key words：recombinant fusion protein of human tumor necrosis factor receptor mutant and Fc fragment；tumor
necrosis factor—d：etanercept
肿瘤坏死因子一d(TNF—Ot)是一种具多种生物
学活性的细胞因子。正常剂量TNF—a与受体结合，
对肿瘤细胞有直接抑制和杀死作用…。然而，过量的
TNF一仅不仅和类风湿关节炎(RA)的滑膜炎症有关，
而且和RA的关节损伤有关，因此被认为是RA发病
中的重要环节。重组TNF—Ot受体突变体一Fc融合
蛋白[rhTNFR(m)：Fc]是一种我国自主研发的依那西
普突变体，在其基础上进行了2个氨基酸位点的突
变。临床前研究表明拉J，rhTNFR(m)：Fc相对于依那
西普，与TNF具有更高的亲和常数，能够更加有效地
阻断TNF的体外生物活性。本研究旨在考察使用
rhTNFR(m)：Fc后，中国健康志愿者血浆中游离
TNF—Ot以及总TNF—Ot(包括游离TNF—d以及
TNF—a与rhTNFR(m)：Fc结合复合物)的水平变化，
探索其可能的作用机制，为后续患者的临床研究提供
参考依据。
材料、对象与方法
l药品、试剂与仪器
rhTNFR(m)：Fc预装针注射液，规格：每支30
ms／0．6 mL，批号：20130403，上海复旦张江生物医药
股份有限公司生产。Meso Scale Discovery(MSD)试剂
盒V—PLEXHuman TNF—Ot Kit，美国MSD公司生产。
Multifuge 1S—R低温高速离心机，美国Thermo
Scientific公司产品。
2受试者选择
入选56名中国健康成年志愿者，男女各半，年龄
18～45岁，体重指数(BMI)19—24 kg·m～。本研究
经北京大学人民医院伦理委员会批准。所有志愿者
均签署书面知情同意书。
诊断与入选标准①志愿者无中枢神经系统、心
血管系统、肾、肝、消化系统、呼吸系统、代谢系统的明
确病史；②在试验前7 d内，体检合格，各项检查[血
常规、尿常规、血生化、x线片、心电图、腹部计算机断
层扫描技术(CT)等]基本在正常范围内。
排除标准筛选前3个月内献过血或参与其他
临床试验者，筛选前2周内使用过处方和或非处方药
物者，过敏性体质或者既往对食物、药物过敏者，筛选
期间各项检查不合格者，抗药性抗体阳性者，妊娠、哺
乳期妇女或在3个月内有妊娠计划者，有吸毒或药物
滥用病史者，每日吸烟超过5支香烟或每周饮用酒精
超过28单位者。
3试验设计和给药方法
本试验按开放、单次给药、剂量递增的临床研究
方法设计。
56名中国健康成年志愿者，分为6组，分别予以
rhTNFR(m)：Fc 10，20，35，50，65，75 mg，起始剂量组
为6例，其余5组均为lo例。志愿者于给药前l天，
入住北京大学人民医院I期临床试验病房，晚餐后，
禁食不禁水，12 h过夜；次日早晨8：00，空腹皮下注射
试验药物，给药后2 h可饮水、给药后4 h统一进食午
餐。试验期间，避免剧烈运动，清淡饮食，禁饮茶、咖
啡及其他含咖啡和醇类饮料。
4样本采集和处理
于给药前(O h)和给药后4，48，96，168，216，264，
312，384，480 h，取静脉血4 mL，放入肝素抗凝管中，
室温放置30 min后，以4000 r·min。1离心10 min，分
离血浆，置于一80℃保存，待测。
5检测方法
用电化学发光检测法建立标准曲线来计算各志
愿者给药后不同时间点的血浆中游离TNF一仅和总
TNF一仪的浓度。所建立测定方法的线性范围、特异
性、精密度及准确度等均符合美国食品药品监督管理
局／国家食品药品监督管理总局(FDA／CFDA)关于生
物制品的药代动力学研究的指导原则和要求。
方法学验证结果表明：①本方法游离TNF一仪和
总TNF一0【的线性范围分别在1．06～642．00
Pg·mL‘1和0．156～642．00 Pg·mL～。②通过3个
不同实验日期，对标准曲线范围内高、中、低浓度质控
进行重复检测，结果显示，游离TNF一仅和总TNF—d
各浓度点复孔之间重现性较好：游离TNF—Ot，精密度
(CV％)≤4．4％，准确度(RE％)为一12．1％一12．7％；
总TNF—Ot，CV％≤7．3％，RE％为一4．1％～5．2％。
万方数据
314 中国临床药理学杂志
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③3次分析批次分别进行高、中、低浓度验证方法的精
密度和准确度，游离TNF—d和总TNF—d批问和批
内CV％均<20％，批间和批内RE％均<20％。④本
方法游离TNF一0【的定量下限为1．06 Pg·mL一，总
TNF一0【定量下限为0．156 Pg·mL-‘。
6统计学处理
本试验血浆样品中游离TNF—o【以及总TNF一0【
的浓度通过方法学所建立的标准曲线进行计算。t一，
C一用实测值表示。剂量线性评价用Power模型
In(AUC或C。。)=斗+131n(dose)评价暴露量与剂量
的线性关系。通过方差分析得到p和其90％置信区间，
如果90％置信区间落在[1+ln0．8／lnRd，1+lnl．25／
lnRd](Rd=最大剂量／最小剂量)，体内的暴露量与剂量
呈线性关系口1。用SPSS 18．0软件进行单因素ANOVA
分析。
结 果
1一般资料
本试验共设6个剂量组，每组男女各半，56名志
愿者全部完成试验。6组志愿者的一般资料比较，差
异均无统计学意义(均P>0．05)，组间具有可比性，
见表l。
2血浆游离TNF一仅浓度的变化情况
健康志愿者单次皮下注射rhTNFR(m)：Fc后，
在给药后0～264 h，各剂量组血浆中TNF—Ot水平
均呈现明显的上升趋势；在给药后264～480 h，各
剂量组游离TNF—Ot水平逐渐下降；在给药后480
h，大部分志愿者血浆中游离TNF—Ot浓度恢复至
给药前水平，见表2。在10～75 mg剂量内，用幂
函数模型分析游离TNF一仪的C。。，与给药剂量的
线性关系，结果显示，13值90％置信区间不在线性
区间内。
3血浆总TNF—Ot浓度的变化情况
健康志愿者单次皮下注射rhTNFR(m)：Fc后，在
给药后0—216 h，各剂量组血浆中总TNF一0【浓度均
有明显地上升趋势；在给药后216～312 h，各剂量组
总TNF—Ot浓度达到峰值，随后开始逐渐下降；在给
药后480 h，血浆中总TNF—Ot浓度仍高于给药前水
平，见表3。在10～75 mg剂量内，用幂函数模型分析
总TNF一仅的C一与给药剂量的线性关系，结果显示，
13值90％置信区间不在线性区间内。
表1 6组志愿者的一般资料比较[P50(min～ma】【)]
Table 1 Comparison of the general information in six groups[Pso(min—max)]
Age(year) 25．0(21．0—27．0)25．0(21．0—32．0)23．5(20．0—30．0)24．5(20．0—28．0)26．0(23．0—31．0)25．0(19．0—28．0)
HeJight(m) 1．66(1．63—1．77)1．66(1．53—1．75)1．66(1．54—1．75)1．68(1．52—1．77)1．72(1．49一1．82)1．69(1．49—1．90)
Weight(kg) 61．1(53．0—66．3)60．7(45．3-73．3)56．8(49．2—70．1)61．2(46．8—74．4)63．2(50．9—74．8)59．0(49．3—75．7)
曼丛!(蛭：竺：：2 11：!!!!：!二!!：兰2 11：垒l!!：兰二兰!：竺2 11：!!!!：!二丝：1 2 11：兰!!!：!二!!：1 2 11：!!!!：!：!!：1 2垫：!!!!：竺：!!：1 2
BMI：Body mass index
表2单次给药后，血浆中游离肿瘤坏死因子一c￡(TNF—d)浓度(Pg·mL～，元±s)
Table 2 Plasma concentration of free tumor necrosis factor—Ot(TNF一0【)following single—dose administration(Pg·mL一1，面±s)
BQL：Below the quantification limit；4：Pso(min—max)
万方数据
Chin d Clin PharmacoI 3 15
IIII
V01．34 NO．3 February 2018(Serial No．257)
表3单次给药后，血浆中总TNF—o【浓度(Pg·mL～，元4-s)
Table 3 Plasma concentration of total TNF一仅following single—dose administration(Pg·mL一1，元±s)
‘：P50(min—max)
表4单次给药后，游离TNF一仪和总TNF—Of．峰浓度的比较(i±s)
Table 4 Comparison of the free TNF一理C。and total TNF—Of．C=I following single—dose administration(-I-s)
Comparedwithfree TNF—Ct C∞，+P<0．05
4单次给药后。血浆游离TNF一仪和总TNF—Ot峰
浓度的比较
单次给药之后，随着剂量的增加，血浆游离
TNF一仅的峰浓度具有逐渐下降的趋势，而血浆总
TNF一仅的峰浓度具有先降低后增高的趋势。在10，
20 mg剂量组，血浆游离TNF—Ot的峰浓度略高于总
TNF—Ot的峰浓度，但差异均无统计学意义(均
P>0．05)；在35，50 mg剂量组，血浆游离TNF—Or．和
总TNF—d峰浓度近似相等，差异均无统计学意义
(均P>0．05)；在65，75 mg剂量组，血浆中总TNF一仅
浓度均显著高于游离TNF一仅浓度，差异均有统计学
意义(均P<0．05)，见表4。
讨 论
本研究结果显示，单次给药后，rhTNFR(m)：Fc
与体内TNF—d结合，但血浆中游离TNF一仅和总
TNF—d水平均呈现明显的上升趋势。这可能是由于
药物和血液中TNF结合后，刺激机体内源性TNF一仅
的大量产生与释放，同时由于rhTNFR(m)：Fc与大量
游离TNF一仅的结合，导致血浆总TNF一0【水平同样
升高。依那西普在健康人和患者的相关临床研究中，
也观察到TNF—d升高的现象【4-7]。TRACEY等[81研
究发现，相对英夫利昔单抗和阿达木单抗，依那西普
可以显著地提高TNF一仅浓度，其原因可能是由于
依那西普Fc片段的构象和空间结合位点与其它单
抗药物不同。本试验药物与依那西普具有相似的
融合蛋白结构，引起体内TNF一0【升高的机制可能
是相似的。研究表明∽J，依那西普主要与可溶性
TNF(sTNF)结合，几乎不与跨膜TNF(tmTNF)结
合，从而使得I型TNF受体(TNFRl)被拮抗，Ⅱ型
TNF受体(TNFR2)相关的抗凋亡及TNF转录作用
得以凸显，这可能是体内TNF—a浓度升高的主要
原因。
强直性脊柱炎患者使用依那西普后，尽管体内
TNF一Ⅸ浓度升高，但是疼痛得到减轻，临床症状得到
缓解口J。NEREGARD等¨叫研究显示，依那西普能够
降低类风湿关节炎患者关节滑膜液TNF—a和淋巴
毒素仅的表达，这可能是其具有临床疗效的主要原
因。在今后进行rhTNFR(m)：Fc对于RA患者的研
究时，可以测定患者关节滑膜内TNF一仅浓度和活
性，进一步探索rhTNFR(m)：Fc对于TNF一仅的作用
机制。
(下转第326页)
万方数据
326 中国临床药理学杂志
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患者的救治，应尽可能在中毒4～12 h内进行血液
灌流，随着时间的延长，当百草枯大量分布到各组
织器官后，继续灌流意义不大。本研究的2名患者
中，患者1在中毒数天后才进行针对性治疗，错过
了最佳救治时间，此时已出现严重的多器官衰竭症
状，进行血液灌流后仍未见好转，预后极差。患者
2人院时间为中毒4 h，入院后及时清除毒物，进行
血液灌流等治疗，未见组织器官损伤等，预后良好。
百草枯中毒患者的临床症状和预后情况与患者的
服毒量、血浆浓度、年龄和人院时间等因素密切相
关，因此，及时掌握患者病史，检测血浆百草枯浓度
对百草枯中毒患者的诊断、治疗及预后情况都有重
要的意义。
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(本文编辑戴荣源)
(上接第315页)
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(本文编辑戴荣源)